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网站建设存在的问题及解决办法,爱南宁app下载,网络模块,宁波网站设计相信荣胜网络凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验#xff08;Electrophoretic Mobility Shift Assay#xff0c;EMSA#xff09;#xff0c;其原理基于蛋白-探针复合物在凝胶电泳过程中比对照组迁移更慢#xff0c;是一种用于检测蛋白与核酸相互作用的技术。背景说明EMSA主要…凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验Electrophoretic Mobility Shift AssayEMSA其原理基于蛋白-探针复合物在凝胶电泳过程中比对照组迁移更慢是一种用于检测蛋白与核酸相互作用的技术。背景说明EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针当核酸探针与蛋白样本混合孵育时样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物这种复合物由于分子量大在进行PAGE电泳时迁移较慢而没有结合蛋白的探针则迁移较快。孵育的样本在进行PAGE电泳并转膜后蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带说明有蛋白与目标探针发生互作。图 EMSA基本原理示意图服务流程客户在线下单——订单/实验材料确认——实验设计——原核系统表达载体构建——蛋白纯化——合成探针——样品制备——配置非变性PAGE胶——电泳——转膜——交联——封闭——抗体孵育——洗涤显影——提交详细的实验报告服务内容及说明适用范围1、用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用2、可用于DNA定性和定量分析3、用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。凝胶迁移实验EMSA的优点1、EMSA实验容易掌握简单易行要求的实验条件不苛刻可以适应一定范围内的反应条件变动2、同位素标记探针具有非常短的半衰期并且对人的健康有害而生物素标记更稳定、准确和方便且亲和力高3、该技术可以检测的核酸分子大小和结构单链、双链、三链、四链、环状核酸范围很广4、在合适的条件下在单个反应体系中就可以通过不同复合物的形成检测不同蛋白与不同核酸分子之间的结合情况5、能检测的蛋白大小范围很广从寡肽到转录因子复合物都能检测并且该实验既可以使用纯蛋白也可以使用细胞提取物。凝胶迁移实验EMSA的缺点1、 无法衡量电泳过程中的化学平衡在电泳过程中发生的快速解离会影响对复合物的检测2、在EMSA实验中复合物的形成与许多因素有关并不能直接反映分子大小或者鉴定复合物中的各种蛋白质3、EMSA实验不能提供蛋白结合在核酸上的准确序列位置4、EMSA在很大程度上属于定性实验比如可以检测蛋白-DNA复合物的形成与否并不能精细的检测结合反应的上调或下调5、EMSA实验中并不考虑体内环境中影响蛋白DNA结合的因素比如染色质的结构对复合物形成的影响因此即使EMSA实验结果反映蛋白可以与DNA结合在体内环境中也许还需要其它条件才能完成结合反应。因此EMSA适用于在初步研究蛋白与核酸相互作用时使用。客户下单及项目信息填写在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式提交项目所需要的具体信息包括1、与EMSA相关的目的基因与蛋白信息2、样品种属及类型3、其他与EMSA相关的信息。实验信息实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户并发送实验报告查看网址。实验结题后实验报告检测结果可在线查看或打印并永久保留。实验交付内容1、重组载体的全序列信息和注释信息2、重组载体的酶切图谱3、重组载体的测序结果4、重组载体一份质粒、一份大肠杆菌菌液25%甘油菌(上述4点是客户需要构建载体且客户自身需要才提供)5、探针设计合成信息6、实验图片原始蛋白纯化考染图及WB结果图7、实验报告。案例展示图 探针MYS1与蛋白GST-MYBS1有迁移条带竞争型探针MYS1能够竞争掉部分探针MYS1与蛋白GST-MYBS1的迁移条带突变型探针MYS1与蛋白GST-MYBS1没有迁移条带。参考文献Li W, Zhu Z, Chern M, et al. A Natural Allele of a Transcription Factor in Rice Confers Broad-Spectrum Blast Resistance.Cell. 2017;170(1):114-126.e15.LaSarre B, Federle MJ. EMSA Analysis of DNA Binding By Rgg Proteins.Bio Protoc. 2013;3(15):e838.Li W, Wang K, Chern M, et al. Sclerenchyma cell thickening through enhanced lignification induced by OsMYB30 prevents fungal penetration of rice leaves.New Phytol. 2020;226(6):1850-1863.